IHC用Frozen試料の作製
IHC用試料作製法（Frozen)
灌流固定後の試料をCryoミクロトームで薄切できる試料にする際の手順
本プロトコルは固定液として4%FA/PBSを用いたものとする．
(※洗浄用バッファは固定液と同じバッファを用いるので，適宜変更する）
* 灌流固定後，試料を速やかに取り出す．
* 厚さ1~2mm程度にトリミングする．
* immersion in fixative 2-4 h @4ºC
* 3 rinses with PBS @4º (※固定液と同じバッファ）
* immerse 30%Sucrose/PBS @4º 10min [] 10min[] Overnight []
* place on the cryo-mold and embed in OCT compound
* frozen with dry-ice chilled ethanol
注意：Cryo-moldにラベルを書く場合は，上面にサインペンで行う．
(作成日（試料番号），材料の種類，作成者名等を全てのサンプルに書く）
凍結時には，このラベルにエタノールがつかないように注意．
（文字が全部消える．また，低温では書けない）
凍結前，試料は事前に氷の上で十分冷やしておくと凍結が早く，良い結果が得られる．
図のように，角を曲げ，持針器でつまみ，モルドの底面だけが
冷エタノールにつくように行う．30秒程度で凍結する．
K.OHTA, AIRC-Kurume U. Sch. Med.